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醫(yī)學(xué)魔改大師玩跨界,CRISPR遇見分子診斷
發(fā)布時(shí)間:2022-01-19

引言   

2020年,瑞典皇家科學(xué)院將諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)授予Jennifer Doudna教授Emmanuelle Charpentier博士以表彰她們?cè)贑RISPR/Cas9基因編輯方法上所做出的貢獻(xiàn)。得益于此,基因療法隨之大放異彩,在很短的時(shí)間內(nèi)完成了由基礎(chǔ)理論到初步科學(xué)驗(yàn)證,再到實(shí)際應(yīng)用的快速發(fā)展。但這一科學(xué)技術(shù)卻也一直伴隨著爭(zhēng)議的聲音,給人無(wú)限遐想的同時(shí),也帶來(lái)一些隱憂。瑕不掩瑜,這些暫時(shí)的爭(zhēng)議阻擋不了人類對(duì)于這一充滿潛力的新技術(shù)擴(kuò)展應(yīng)用的嘗試。近年來(lái),以基因編輯而聞名的生物技術(shù)正被用于開發(fā)便攜式、家庭式的傳染病和癌癥測(cè)試等分子診斷領(lǐng)域。CRISPR/Cas的神秘面紗正在被緩緩揭開。


安永生命科學(xué)與醫(yī)療健康行業(yè)課題組對(duì)話專家,帶你走近:CRISPR/Cas基因編輯遇見分子診斷。

專家介紹   

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張明東  博士

現(xiàn)任波士頓科學(xué)亞太區(qū)首席醫(yī)務(wù)官及醫(yī)學(xué)事務(wù)和衛(wèi)生經(jīng)濟(jì)副總裁

前美國(guó)食品藥政管理局醫(yī)務(wù)官和流行病學(xué)家

曾任職香港中文大學(xué)醫(yī)學(xué)院教授

美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院國(guó)立癌癥研究所博士后

美國(guó)貝樂(lè)醫(yī)學(xué)院分子病毒學(xué)博士

“CRISPR/Cas技術(shù)是一種逆天改命的手段,讓人產(chǎn)生很多瑰麗和美好的遐想?!?/p>

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王弢   博士

中國(guó)抗癌協(xié)會(huì)腫瘤標(biāo)志專業(yè)委員ctDNA技術(shù)專家委員會(huì)副組長(zhǎng)

江蘇省腫瘤分子診斷工程技術(shù)研究中心主任

蘇州大學(xué)(特聘-產(chǎn)業(yè)方向)教授

復(fù)旦大學(xué)醫(yī)學(xué)博士

              “CRISPR的應(yīng)用,起步于醫(yī)學(xué),終將不止于醫(yī)學(xué)?!?/p>

 

                                                                                

  對(duì)話專家   


Q1

CRISPR/Cas一直存在爭(zhēng)議,您建議安永公眾號(hào)的讀者如何正確理解這一技術(shù)?


張明東:          

CRISPR是原核生物基因組內(nèi)的一段重復(fù)序列。Cas基因則位于CRISPR基因附近,或散布于基因組其他地方,該基因編碼的蛋白均可與CRISPR序列區(qū)域共同發(fā)生作用。因此,該基因被叫做CRISPR關(guān)聯(lián)基因,即Cas。


生命進(jìn)化史上,某些細(xì)菌為了將入侵的病毒基因清除,進(jìn)化出CRISPR/Cas基因剪切防御系統(tǒng),能夠在遭到病毒入侵后,把病毒基因的一小段存儲(chǔ)到自身 DNA 里稱為 CRISPR 的存儲(chǔ)空間中。這樣,當(dāng)病毒再次入侵時(shí),細(xì)菌便可以根據(jù)存儲(chǔ)的片段識(shí)別病毒,并將病毒的DNA切斷達(dá)到抑制作用。這一機(jī)制真正體現(xiàn)了生命之間的微妙平衡,相生相克又不斷進(jìn)化。

 

CRISPR/Cas技術(shù)的發(fā)明,為臨床醫(yī)學(xué)提供了超越以往的工具。原本不可治愈的疾病有了治愈的可能,比如基因變異導(dǎo)致的各類型遺傳疾病、HIV等難以根治的病毒感染,糖尿病易感性人群的基因改造等,甚至還有可能成為更有效的癌癥治療手段。不夸張地說(shuō),CRISPR/Cas技術(shù)可以被稱為是一種逆天改命的手段,讓人產(chǎn)生很多瑰麗和美好的遐想。

 

然而,重大的科技發(fā)現(xiàn)常常伴有不容忽視的兩面性。火藥的發(fā)明,不僅帶來(lái)礦產(chǎn)開發(fā)、道路建設(shè)等生產(chǎn)力的提升,也招致槍械帶來(lái)的巨大人員傷亡;20世紀(jì)最偉大的發(fā)現(xiàn)“相對(duì)論”,開啟了高效、清潔的核能應(yīng)用,卻也讓人們籠罩在原子彈的陰霾之下。對(duì)CRISPR基因編輯技術(shù)來(lái)說(shuō),它使科學(xué)家擁有改造人類疾病基因或消滅生物的能力,也帶來(lái)不受倫理管控下生物武器泛濫甚至畸形生物變異的可能性。這一技術(shù)發(fā)明無(wú)疑是人類自火器時(shí)代到核能時(shí)代以來(lái)所面臨的最嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。

 

王弢:


CRISPR技術(shù)開啟了基因編輯的大幕!這是一項(xiàng)了解生命本質(zhì)、挽救生命甚至創(chuàng)造生命的革命性技術(shù),期待在全球科學(xué)技術(shù)人員的不懈努力下,發(fā)揮它最大的價(jià)值,逐步實(shí)現(xiàn)讓人類遠(yuǎn)離眾多疾病折磨,實(shí)現(xiàn)更健康和更長(zhǎng)壽生活的更多應(yīng)用。2020年新冠疫情突然爆發(fā),恰此時(shí)mRNA疫苗大獲成功,mRNA治療藥物獲得快速發(fā)展。突破性的生物技術(shù)不斷涌現(xiàn),“21世紀(jì)是生物技術(shù)時(shí)代”的預(yù)言正在成為現(xiàn)實(shí)?!?/p>

 

誠(chéng)如明東博士所言,作為這個(gè)時(shí)代光彩奪目明珠的CRISPR有兩面性,如何防范這個(gè)魔法無(wú)窮的工具不被惡意群體肆意濫用,是人類大家庭必須直面的共同課題。我始終相信,每一次技術(shù)突破的洗禮,帶給人類的不僅是生產(chǎn)力的巨大提升,更是人類不斷認(rèn)知自然和自身的過(guò)程,相信在CRIPSR等生物技術(shù)的加持下,人類將會(huì)擁有更美好的家園。


Q2

對(duì)于11月12日《Nature Communication》上發(fā)表的關(guān)于CRISPR/Cas9基因編輯或許會(huì)讓細(xì)胞產(chǎn)生與癌癥相關(guān)的基因突變形式,您覺(jué)得對(duì)產(chǎn)業(yè)界的影響是什么?


張明東:


CRISPR技術(shù)自問(wèn)世以來(lái),就獲得“基因魔剪”的稱號(hào),在醫(yī)學(xué)科研領(lǐng)域可以說(shuō)是百花齊放、碩果累累,同時(shí)在農(nóng)業(yè)、環(huán)境等領(lǐng)域也展現(xiàn)了光明的前景。2020年發(fā)現(xiàn)CRISPR/Cas技術(shù)的科學(xué)家Jennifer Doudna教授和Emmanuelle Charpentier博士榮獲諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng),這是諾貝爾獎(jiǎng)歷史上少見的從發(fā)現(xiàn)到獲獎(jiǎng)僅數(shù)年的現(xiàn)象,也說(shuō)明這是一項(xiàng)多么重要的發(fā)現(xiàn)。


近期,數(shù)篇Nature子刊文章提示,CRISPR會(huì)在體內(nèi)引起不可預(yù)測(cè)的的脫靶效應(yīng),甚至癌癥相關(guān)的突變。因而,CRISPR技術(shù)到底是“魔剪”還是“亂剪”,一時(shí)眾說(shuō)紛紜。從CRIPSR技術(shù)偏靶造成的異常突變而言,這只是這項(xiàng)革命性技術(shù)在應(yīng)用中的一個(gè)插曲,說(shuō)明現(xiàn)在的CRISPR編輯技術(shù)還不夠精準(zhǔn),還需要更多優(yōu)化。需要進(jìn)一步優(yōu)化到單堿基編輯,優(yōu)化到特定部位的單堿基編輯,實(shí)現(xiàn)更精細(xì)精確的基因編輯操作。所以我想,大家不要因?yàn)槟壳癈RISPR技術(shù)有一些瑕疵,就下結(jié)論說(shuō)它多么不堪或者多么危險(xiǎn)。這些瑕疵是完全可以克服的,只是時(shí)間長(zhǎng)短的問(wèn)題。


王弢:


CRISPR技術(shù)出現(xiàn)后,作為一項(xiàng)通用的技術(shù),在實(shí)際應(yīng)用的領(lǐng)域或方向必然存在一些瑕疵,這是十分正常的,需要的是科研人員不斷嘗試、不斷改進(jìn),逐步實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)應(yīng)用。如果都是一路順風(fēng),我想那才是需要每個(gè)人擔(dān)心的。每個(gè)細(xì)分方向或具體疾病應(yīng)用的CRISPR關(guān)鍵細(xì)節(jié)技術(shù)的開發(fā),需要再多一點(diǎn)時(shí)間,我們會(huì)看到更多的實(shí)際結(jié)果,可能許多不可治療的疾病都將變?yōu)榭芍斡募膊?,這一天并不遙遠(yuǎn)??傮w而言,CRISPR的應(yīng)用,起步于醫(yī)學(xué),終將不止于醫(yī)學(xué)。

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Q3

能否談一談CRISPR技術(shù)目前較為成熟的醫(yī)學(xué)應(yīng)用領(lǐng)域,在哪些方面為人類帶來(lái)福音?


張明東:

目前進(jìn)展明顯的治療領(lǐng)域,主要包括:

①癌癥治療,主要針對(duì)免疫細(xì)胞改造,突變細(xì)胞的基因修補(bǔ)或切除等,有多個(gè)臨床研究,部分獲得積極的結(jié)果。 

②遺傳疾病,比如亨廷頓氏舞蹈癥病(Huntington ' s disease)、杜氏肌營(yíng)養(yǎng)不良癥(DMD基因)等已有研究報(bào)道,進(jìn)展到臨床II期及之后也有報(bào)道,但還需要公布相關(guān)臨床數(shù)據(jù)。

③3HIV等病毒的體內(nèi)整合感染方面的應(yīng)用,我想這是近期科研人員比較有把握會(huì)有重要進(jìn)展的領(lǐng)域,值得大家關(guān)注。


王弢:

在醫(yī)學(xué)診斷領(lǐng)域,CRISPR-based核酸檢測(cè)技術(shù)最有可能成為新一代的分子診斷平臺(tái),尤其在遠(yuǎn)離PCR實(shí)驗(yàn)室場(chǎng)景下的應(yīng)用。


醫(yī)學(xué)診斷是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)發(fā)現(xiàn)疾病的入口,提供了疾病的快速預(yù)警和精準(zhǔn)診斷,讓治療有針對(duì)性的明確目標(biāo)。數(shù)十年來(lái),核酸檢驗(yàn)領(lǐng)域,真正得到廣泛應(yīng)用的技術(shù)僅有PCR和NGS,它們當(dāng)中一個(gè)實(shí)現(xiàn)了單靶標(biāo)或少靶標(biāo)檢驗(yàn),一個(gè)實(shí)現(xiàn)了多靶標(biāo)并行檢驗(yàn)。兩者都依賴于大型醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室、專業(yè)操作和大型儀器的應(yīng)用場(chǎng)景,是一種遠(yuǎn)離疾病人群個(gè)體和現(xiàn)場(chǎng)的檢驗(yàn)。


而快速準(zhǔn)確診斷感染性疾病應(yīng)用是目前緊迫的需求,是指導(dǎo)疫情防控,保障公共衛(wèi)生安全,避免大范圍傳播的關(guān)鍵。這一點(diǎn)無(wú)論是對(duì)大型醫(yī)療中心,還是在缺醫(yī)少藥的基層醫(yī)療衛(wèi)生機(jī)構(gòu),或是欠發(fā)達(dá)的國(guó)家和地區(qū)都至關(guān)重要。理想的診斷方式應(yīng)該價(jià)格低廉、準(zhǔn)確性高、快速、操作簡(jiǎn)便(無(wú)需專業(yè)人士操作)以及無(wú)需專業(yè)設(shè)備和基礎(chǔ)設(shè)施要求。

 

從我個(gè)人的意見以及我們的實(shí)踐來(lái)看,CRIPSR-based核酸檢測(cè)技術(shù)是第一個(gè)能真正實(shí)現(xiàn)精確、現(xiàn)場(chǎng)甚至居家自測(cè)的醫(yī)學(xué)應(yīng)用級(jí)診斷平臺(tái)。

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Q4

如何認(rèn)識(shí)CRISPR-based診斷技術(shù),它有哪些重要突破?能否談一談該技術(shù)目前較為成熟的應(yīng)用領(lǐng)域,在哪些方面為人類帶來(lái)福音?


張明東:

CRISPR/Cas技術(shù)以出眾的基因編輯能力聞名于世,但顯然它的技術(shù)應(yīng)用范圍絕不僅限于基因編輯。CRISPR/Cas技術(shù)的創(chuàng)立者之一Jennifer Doudna教授早在2017年就將該技術(shù)應(yīng)用于RNA檢測(cè),創(chuàng)辦Mammoth Biosciences公司,利用Cas12a的非特異性ssDNA降解能力開發(fā)出新的核酸快速檢測(cè)方法。幾乎同時(shí),CRISPR研究先鋒者之一的華人科學(xué)家張鋒教授于2017年創(chuàng)辦Sherlock BioSciences公司,利用Cas13蛋白的天然RNase活性改進(jìn),建立了快速核酸檢測(cè)SHERLOCKTM(Specific High Sensitivity Enzymatic Reporter unlocking)平臺(tái)。


2021年,基于CRISPR檢測(cè)平臺(tái)被美國(guó)《Science》雜志譽(yù)為“下一代分子診斷技術(shù)”! CRISPR顛覆傳統(tǒng)醫(yī)學(xué):一張紙、幾分鐘,即可診斷疾?。≡摷夹g(shù)將在病原檢測(cè)、疾病篩查、精準(zhǔn)醫(yī)療等眾多領(lǐng)域展現(xiàn)巨大的應(yīng)用潛力。


王弢:

Mammoth Biosciences的“DETECTR BOOST”技術(shù)平臺(tái),可在30分鐘內(nèi)獲得診斷結(jié)果。Sherlock Biosciences開發(fā)了首個(gè)獲美國(guó)FDA緊急使用授權(quán)的基于CRISPR技術(shù)新冠病毒測(cè)試,被評(píng)為2021年“全球最具創(chuàng)新力10大生物技術(shù)公司”之一。


在國(guó)內(nèi),有多家生物技術(shù)公司參與開發(fā)了CRISPR-based核酸檢測(cè)技術(shù)的新冠病毒診斷產(chǎn)品,主要還是集中于醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室場(chǎng)景下的操作。為真生物開發(fā)了恒溫?cái)U(kuò)增+CRISPR聯(lián)合應(yīng)用的小型化單人份裝置,首次實(shí)現(xiàn)基于CRISPR新冠病毒核酸的單人自測(cè)或現(xiàn)場(chǎng)快檢,除應(yīng)用于國(guó)內(nèi)渠道外,也在積極申報(bào)美國(guó)FDA緊急使用授權(quán)(EUA)。


CRISPR-based快速檢測(cè)可實(shí)現(xiàn)各類微生物的居家自測(cè)或現(xiàn)場(chǎng)檢驗(yàn),類似于現(xiàn)在家用的血糖監(jiān)測(cè)。我想,在不遠(yuǎn)的將來(lái),一種全新的醫(yī)療形態(tài)將會(huì)逐步呈現(xiàn)。


張明東:


目前CRISPR-based核酸檢測(cè)技術(shù)具有明顯的高靈敏度和高特異性的優(yōu)勢(shì),已實(shí)現(xiàn)1copy/μL檢測(cè),甚至高于常規(guī)的熒光PCR,在病原體檢測(cè)如SARS-CoV-2檢測(cè)方面已實(shí)現(xiàn)臨床應(yīng)用。


應(yīng)用上面,新CRISPR測(cè)試能夠節(jié)省時(shí)間和金錢,甚至不再需要去看醫(yī)生就能做出診斷。這種診斷可以在幾分鐘內(nèi)得出明確的陽(yáng)性或陰性結(jié)果,類似于家庭懷孕自測(cè)。測(cè)試結(jié)果可以通過(guò)手機(jī)上的應(yīng)用程序發(fā)送給醫(yī)生,醫(yī)生可以立即開出處方或給出治療建議。這些測(cè)試還可以在醫(yī)院使用,以快速確定感染病原體,以及引起腫瘤的突變基因,或者快速預(yù)測(cè)人們是否有罹患某種疾病的遺傳基因。


Q5

相比qPCR技術(shù),CRISPR核酸檢測(cè)技術(shù)主要有哪些優(yōu)勢(shì)?CRISPR核酸檢測(cè)技術(shù)產(chǎn)業(yè)化尚需解決的核心問(wèn)題有哪些?從國(guó)外的技術(shù)和臨床試驗(yàn)對(duì)比來(lái)看,國(guó)內(nèi)CRISPR核酸檢測(cè)技術(shù)正處于怎樣的發(fā)展階段?


王弢:

相比qPCR,CRSIPR核酸檢測(cè)技術(shù)擁有獨(dú)特優(yōu)勢(shì): 

①?gòu)?fù)雜背景下的高靈敏度,可對(duì)aM(10-18M)濃度的靶核酸分子進(jìn)行高效檢測(cè);而qPCR技術(shù)很難實(shí)現(xiàn)復(fù)雜背景下靶分子的有效擴(kuò)增。

②復(fù)雜背景下的高特異性。CRISPR核酸檢測(cè)技術(shù)具有極為優(yōu)異的抗干擾性能,可實(shí)現(xiàn)對(duì)單堿基異常的精確監(jiān)測(cè);qPCR影響因素多,抗干擾能力差,難以避免假陽(yáng)的存在。

③更為簡(jiǎn)易的操作,無(wú)需依賴較大的儀器,10-60分鐘內(nèi)完成擴(kuò)增全程;qPCR依賴多步驟的復(fù)雜操作,嚴(yán)格環(huán)境控制,耗時(shí)1-3小時(shí),需要復(fù)雜的大型精密儀器。


張明東:

CRISPR核酸檢測(cè)技術(shù)具有高靈敏度、高特異性和極為顯著的抗干擾等優(yōu)勢(shì),但如何實(shí)現(xiàn)核酸預(yù)擴(kuò)增和CRISPR一體化反應(yīng)是一個(gè)難題,以及如何實(shí)現(xiàn)單人份或高通量快速檢測(cè)也是不同場(chǎng)景下應(yīng)用的需要,還有各種關(guān)鍵生物酶的產(chǎn)業(yè)化是需要解決的核心問(wèn)題。


王弢:

國(guó)內(nèi)CRISPR核酸檢測(cè)技術(shù)的發(fā)展處于快速發(fā)展的起步階段,整個(gè)產(chǎn)業(yè)鏈還不是很成熟。成熟的CRISPR核酸檢測(cè)技術(shù)如果應(yīng)用于院外場(chǎng)景,需做到:

①快速,通常1小時(shí)內(nèi)完成檢測(cè)。

②防污染,全封閉操作。

③高性能,靈敏度和特異性高于或等同于qPCR。

④便捷,各檢測(cè)試劑All in于一管。

⑤常溫儲(chǔ)運(yùn)。


結(jié)束語(yǔ)

基因組中的微小改變,會(huì)帶來(lái)有機(jī)體的巨大變化。隨著科研人員對(duì)生命系統(tǒng)的研究不斷深入和資本市場(chǎng)的強(qiáng)力支持,我們有理由相信,在不遠(yuǎn)的將來(lái),我們將會(huì)看到CRISPR/Cas更加廣泛、成熟地運(yùn)用于臨床,有效治療各種遺傳疾病。但值得警惕的是,這項(xiàng)革命性的技術(shù)也是一把雙刃劍,只有完善相關(guān)法律法規(guī),厘清科技與倫理的邊界,規(guī)范科研行為,才能引導(dǎo)基因編輯領(lǐng)域的健康發(fā)展。

  

參考資料

近日,一篇發(fā)表在國(guó)際雜志Nature Communications上題為“A systematic genome-wide mapping of oncogenic mutation selection during CRISPR-Cas9 genome editing”的研究報(bào)告中,來(lái)自美國(guó)國(guó)立衛(wèi)生研究院等機(jī)構(gòu)的科學(xué)家們通過(guò)研究發(fā)現(xiàn),基于CRISPR/Cas的基因編輯(尤其是基因敲除)或許會(huì)讓正常細(xì)胞產(chǎn)生與癌癥相關(guān)的基因突變形式,“基因剪刀”再引爭(zhēng)議。

 

本文中的觀點(diǎn)僅代表受訪者個(gè)人觀點(diǎn),并不一定反映安永全球機(jī)構(gòu)或其成員機(jī)構(gòu)的觀點(diǎn)。

 

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生命科學(xué)與醫(yī)療健康行業(yè)課題組

 

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采訪稿整理:

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王丹

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李東旭

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李莉

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費(fèi)凡

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吳曉穎

安永大中華區(qū)生命科學(xué)與醫(yī)療健康行業(yè)聯(lián)席主管合伙人

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